活細胞的“聚光燈”——前沿活細胞成像的案例分享

活細胞系系的“聚光燈"——科技前沿活細胞系系三維成像的典例分亨

的內部是切活力的意義的總體機關單位，組合而成了各種千奇百怪的活力的意義體。故而實驗方案的內部的構造及及的內部活力的意義行動歷程就可以協助我門太深入地實驗活力的意義的魅力，熟知活力的意義體是怎么樣去 在校園營銷推廣運動的環節之中所構建和運行機制的。傳統與現代的的內部顯微術就只能在關注確定的的內部生物標本做好估測，但已然失“活"的的內部已然無非癥狀新陳排泄、訊號減壓反射等活力的意義行動，無非癥狀活的內部的真實際情況。故而活的內部顯微術越多越會受到活力的意義實驗實驗方案專家學者的親睞，都可以在的內部如果有活力沒收違法所得于常規生物學行動的壯態下做好關注，協助實驗家更快地實驗方案的內部間的彼此功能，及及做好藥劑研制和淘汰等等方面的技術應用。將在里，我門整里了近好幾年產于Lumencor的白燈點光源用到于活的內部顯微術的前沿性實驗方案，想要能為您的實驗方案引致寫作靈感。

神經神經細胞內外Ca2+，線粒體膜電勢差和神經神經細胞質乳酸的如何延時激光散斑

來自威斯康星大學麥迪遜分校Sophia M. Sdao, Thuong Ho, Chetan Poudel等科學家研究了CDK2和β活細胞之間的關系，發現CDK2可以抑制β活細胞的氧化糖代謝和胰島素分泌，同時對β細胞的代謝信號和K(ATP)通道有重要影響。作者利用一個可誘導的β細胞特異性CDK2缺失的小鼠模型(CDK2-IKO)進行研究，發現這種小鼠的葡萄糖耐受性和葡萄糖刺激的胰島素分泌都有所提高。實驗中通過多種方法測量了CDK2-IKO小鼠的β細胞電活性、鈣信號、NAD(P)H熒光壽命、乳酸水平和線粒體膜電位。在搭建怎么延時影像生物傳感器時，采用Lumencor SOLA SEII 365作為熒光激發光源，并且基于Lumencor精確的電子控制系統，可以快速調節光輸出的強度，設置為<20%的功率輸出。

可以參考畢業論文Sdao S M , Ho T , Poudel C ,et al.CDK2 limits the highly energetic secretory program of mature β cells by restricting PEP cycle-dependent KATP channel closure[J].Cell Reports, 2021, 34(4):108690.DOI:10.1016/j.celrep.2021.108690.

HuH-7人肝癌細胞中GFP表達方法的20幾小時定時器顯像

非病毒基因遞送是基因治療領域的一個快速發展的研究課題，其低免疫原性避免了免疫系統對外源基因的排斥和攻擊，提高了基因治療的安全性和有效性，但受到合成核酸納米載體在內吞體內停留時間的限制。為了克服這種瓶頸，需要一種能夠同時測量納米載體的攝取動力學和轉染效率的方法。慕尼黑大學的研究人員A. Reiser, D. Woschée, N. Mehrotra等人使用單細胞陣列的活組織成相(LISCA)來研究不同血清條件下基于脂質mRNA復合物的遞送時間分布，文中使用HuH-7肝癌細胞作為系統模型（RNA治療的主要靶器官之一）。該方法可以同時監測數百個單細胞的eGFP報告基因表達，通過擬合到模型，即可得到每個單細胞的表達起始時間和表達速率等參數。本文采用微結構單細胞陣列和自動活細胞延時顯微鏡來收集單個熒光時間過程。其中用于時間延遲成相的時間分辨熒光顯微鏡搭載的即是來自Lumencor的SOLA-SE II LED光源。

參考選取文獻綜述Reiser A ,D Woschée, Mehrotra N ,et al.Correlation of mRNA delivery timing and protein expression in lipid-based transfection[J].Integrative Biology, 2019, 11(9).DOI:10.1093/intbio/zyz030.

用mtk量多色熒光顯微鏡檢查一個結腸桿菌細胞膜雙鏈脫落修護

來自瑞典烏普薩拉大學和皇 jia理工學院的研究人員Wiktor J, Gynn? A H, Leroy P等在Nature上發表了一篇探索活細菌中RecA螺旋絲如何通過同源重組修復雙鏈DNA斷裂（DSB）機制的文章。在一個可誘導的DSB系統中，利用mtk量、微流控和熒光顯微技術，直接觀察大腸桿菌中DSB修復的過程，以及RecA蛋白在修復中的動態變化，如下圖中所展示的。

在搭建實驗所用的熒光顯微鏡時，Lumencor的Spectra III 系列的熒光光源與Nikon的Ti2-E倒置顯微鏡以及Andor的Sona 4.2B-11 scmos相機組合使用。顯微鏡由運行內建插件Micro-Manager控制。而熒光光源由相機通過TTL連接觸發，使用電子快門控制。Lumencor的TTL觸發輸入可以外部控制集成的八個光源的選擇以及開關，憑借精確的電子控制，切換速度間隔可達10μs。

 規范醫學文獻Wiktor J, Gynn? A H, Leroy P, et al. RecA finds homologous DNA by reduced dimensionality search[J]. Nature, 2021, 597(7876): 426-429.

什么是基因商品代碼直流電壓指示器劑 （GEVI） JEDI-1P 在解離的大鼠皮藝和海馬神經系統元中的成相

使用基因編碼的電壓指示劑（GEVI）進行寬場成像是了解大型皮層網絡在神經編碼行為中的作用的一種有前景的方法。萊斯大學以及埃默里大學的研究人員開發了一種針對單光子成像優化的GEVI和改進的方法，應用于小鼠長期的全腦電壓降影像。并通過一個自動化高通量篩選平臺，使其具有快速的動力學、高亮度、高靈敏度和在寬常單光子照明下的高光穩定性。在多輪定向進化后，產生了在所有指標上都有所提高的JEDI-1P，這是一種綠色的熒光指示劑，zui終研究人員成功在清醒小鼠中實現了穩定的全腦電壓成像。

為了以高通量的方式評估GEVI的性能，研究人員搭建了一個基于倒置顯微鏡（A1R-MP,Nikon Instruments）自動化多模式的96孔篩選平臺。由Lumencor的LED光引擎（SpectraX）產生激發光，通過液態光波導（LLG）引導至顯微鏡的熒光頂置照明器。其中青色光(中心波長/帶寬，470/24nm)和綠光(550/15nm)通過物鏡分別照射到樣品臺上，激發基于GFP的GEVI以及mCherry。

Fura-2 Ca2+在小鼠垂體腫瘤細胞中的成相

為了探究蛋白酪氨酸磷酸酶受體N和N2（PTPRN和PTPRN2）在小鼠繁殖過程中的性別特異性作用機制，美國國立衛生研究院的尤尼斯肯 ni 迪施萊佛guo家兒童健康與人類發展研究所 (Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development)的研究人員對PTPRN和PTPRN2進行雙敲除（DKO）,結果導致雌性小鼠不育，表現出青春期延遲、無排卵、卵巢基因表達和類固醇合成的改變。而雄性小鼠則大部分育性不受影響，睪丸的基因表達、類固醇合成以及生殖器官的發育沒有明顯影響。在研究過程中，鈣鋁離子成相的技術被用于研究垂體細胞的成像，研究PTPRN和PTPRN2的缺失對垂體促性腺激素細胞（gonadotrophs GnRH）的鈣信號的影響。340/30nm和380/20 nm的激發帶通由Retra II光引擎（Lumencor,Beaverton,OR）提供，激發帶通通過510/84nm的濾光片進行了檢測。

該圖顯示新一些GnRH（100pM）引導培養垂體內部中的鈣訊號資料。實驗設計便用來于WT和DKO雄性和雌性小鼠的內部通過。 

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